自发活动视频分析系统和大小鼠抓力测定仪-加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

摘要: 目的     探讨加味涤痰汤灌胃对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响。方法     选取 SPF 雄性 SD 大鼠 90 只，分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组 5  组，每组大鼠 16  只。采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) ，于造模成功后 24 h 假手术组与模型组灌胃生理盐水，中药高剂量组、中药低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1． 92、0． 96  g / ( kg·d) ，西药组灌胃吡拉西坦片 0． 5  g / ( kg·d) ，灌胃容积为 10  mL / kg; 1 次/ d，连续给药 7  d。各组于**开始及**结束 24  h 内进行神经行为学测试并记录，于给药周期结束 24 h 内，取脑组织切片、染色、拍照，计算各组梗死体积比及缺血侧大脑水肿度。结果 **后神经障碍评分及平衡木行走实验得分中药高剂量组、西药组与模型组比较明显减低( P 均 ＜ 0． 05) ，中药低剂量组*为显著 ( P ＜ 0． 01) ; 中药高剂量组、中药低剂量组、西药组较模型组自发活动次数明显增多( P 均 ＜ 0． 05) ，中药高剂量组*为显著( P ＜ 0． 01) ，中药低剂量组及西药组亦明显增多( P  均 ＜ 0． 05 ) ，中药高、低剂量组与西药组比较，P  均 ＜0． 05; 中药高剂量组、中药低剂量组、西药组与模型组脑梗死体积相比均明显降低( P 均 ＜ 0． 01) ; 中药低剂量组、西药组缺血侧大脑水肿度明显降低( P 均 ＜ 0． 01) 。结论     加味涤痰汤灌胃对缺血再灌注损伤大鼠神经功能有保护作用，能提高受累肢体肌力、恢复精巧运动，减少脑梗死体积。

关键词: 脑缺血再灌注损伤; 加味涤痰汤; 中药; 神经保护; 大鼠

doi: 10． 3969 / j． issn． 1002-266X． 2016． 41． 010

中图分类号: Ｒ651． 1文献标志码: A文章编号: 1002-266X( 2016) 41-0036-03

缺血性脑卒中是脑血管病中*常见的种类型，约占全部脑血管病的 80% 。脑缺血定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加 严重的脑功能障碍，称为脑缺血再灌注( CIＲ) 损伤［1］。缺血再灌注损伤是缺血性脑卒中导致神经功能障碍的主要病理基础，缺血性脑卒中属于中医 “中风”范畴，出自《济生方》的涤痰汤有涤痰开窍之功，是**急性期缺血性脑卒中的有效方剂。2015 年 1 月 ～ 2016 年 1 月，我们探讨了加味涤痰汤灌胃对 CIＲ 损伤大鼠神经功能的影响。

1材料与方法

1． 1材料雄性 SD  大鼠 90  只，SPF  ，体质量 140 ～ 160  g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号 SCXK( 京) 2012-0001，质量合格证号 NO． 011400700055671。2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 购于国药集团化学试剂有限公司; 苏木色精、曙红  Y、甲苯胺蓝等试剂均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。实验仪器系统冠状切脑，; LEICA  ＲM2245  切片

机，LEICA  HI1220  烤片机，LEICA  XL  全自动染色机，OLYMPUS  BX51  生物显微镜; FED53  恒温干燥箱; LEICA ASP200s 全自动全封闭脱水机，LEICAEG1150H 包埋机; 电热恒温鼓风干燥箱; 自发活动视频分析系统和大小鼠抓力测定仪。中药加味涤痰汤( 胆南星 12 g、石菖蒲、橘红、栀子、枳实各 10  g，半夏 9  g，水蛭、生大黄各 6 g) ，采用北京康仁堂药业全成分中药配方颗粒，每剂 9． 6  g。西药吡拉西坦片( 0． 4  g / 片) 。

1． 2    CIＲ 损伤模型建立与分组    以 10% 水合氯醛按 3． 5  mL / kg 麻醉大鼠，按照 Clark  等［2］的方法，采用可逆性大鼠脑中动脉闭塞线栓法进行右侧大脑中动脉栓塞( MCAO) 手术，缝合皮肤切口并**。假手术组除不插入线栓外过程相同。缺血 90 min 后拔出栓线进行再灌注［3］，再灌注 90  min 时进行神经功能障碍评分，参照 Longa 等［4］ 制定的标准进行评分，神经功能评分为1 ～ 3 分的MCAO 大鼠和0 分的假手术大鼠为本实验选用。实验共分为 5 组: 假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组，假手术组选用 0 分的假手术大鼠 16 只，其余 4 组随机选取造模成功大鼠各 16 只; 假手术组与模型组灌胃生理盐水，中药高、低剂量组分别灌胃加味涤痰汤 1． 92、0． 96  g / ( kg·d) ，西药组灌胃吡拉西坦片 0． 5  g / ( kg·d) ，灌胃容积为 10  mL / kg; 于造模成功后24 h 给药，1 次/ d，连续给药7 d，固体饲料和水自由摄取。

1． 3    神经行为学测试    各组于**开始及**结束 24 h 内进行神经行为学测试并记录。①神经功能障碍评分: 参照 Longa 等［4］ 制定的标准进行评分。②平衡木行走实验［5］: 测定大鼠运动整合及协调能力，术 1 周每天早晚各训练 1 次，每次 10 min，使其能顺利在平横木上行走。平衡木长 80 cm、宽 2． 5  cm，平放在距离地面高 10  cm 处，参考 Feeney 的计分标准。③自发活动次数和抓力: 将每只大鼠单独置于暗室之中，采用自发活动视频分析 系统记录 10  min 中内的自发活动次数，并用抓力测定仪对大鼠逐进行抓力测试。术 1 周每天早晚各训练 1 次，使大鼠适应暗室及对抓力板抓握。④ 脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度: 各组给药周期结束 24  h 内进行神经行为学测试后将大鼠断头取脑，取用的脑组织置于冰浴中迅速切片，切片厚度 3 mm，37  ℃ 避光 TTC 染色约 30  min，取出脑片，拍照，用 Image-Pro Plus 6． 0 软件处理图片，计算各组梗死体积比 同时计算缺血侧大脑水肿度 。

1． 4    统计学方法    采用 SPSS17． 0 统计软件。计量资料以 x珋± s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较采用 LSD 法。P ＜0． 05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2． 1    各组**后神经功能障碍评分、平衡木行走实验得分比较 见表 1。

 

2． 2各组**后自发活动次数和抓力测量结果比较见表 2。

2． 3各组**后脑梗死体积比和缺血侧大脑水肿度比较见表 3。

 

3 讨 论

       中医认为中风的发生与“风、火、痰、瘀、虚”密切相关。其中痰是人体水液代谢失常而形成的病理产物，是中风发生过程中重要的致病因素，并能影响**的发展、转归。现代研究表明，CIＲ 损伤是个多环节、多联的病理生理过程，与自由基的过度形成、神经细胞内钙离子超载、兴奋性氨基酸的细胞毒作用、炎性反应和细胞凋亡等多种机制相关［1］。目研究应用的神经保护剂多是针对 CIＲ 损伤中的某个环节起效［7］，但由于 CIＲ  损伤机制的复杂性，可能使用任何阻断单环节的**疗效不佳。中药复方具有化学成分多样性、生物活性广泛性的 特性，在阻断 CIＲ 损伤发**展中可从多靶点、多层次、多环节发挥作用。

      涤痰汤主治“中风痰迷心窍，舌强不能言”，临床对急性缺血性脑卒中的**有确切疗效［8］。本 研究采用加味涤痰汤，方中半夏燥湿化痰，胆南星祛 风痰而止痉，共为君药; 橘红化痰**，枳实主降气、行痰湿，石菖蒲祛痰开窍; 栀子清热泻火，大黄泻热通便，水蛭**逐瘀通络; 诸药合用具有豁痰开窍、醒神通络的功效。本研究发现，中药高、低剂量组、西药组大鼠在用药周期结束后神经功能障碍评分、平衡木行走实验得分、10  min 内自发活动次数及抓力均较模型组有所改善，表明涤痰汤无论高、低剂量 均能有效改善 MCAO 大鼠神经功能，提高受累肢体肌力，恢复受累肢体精巧运动功能。从**应用剂 量上看，中药高、低剂量组均有明显神经保护作用， 两组比较差异无统计学意义，无明显的量效关系。中药高、低剂量组及西药组均能有效减少脑梗死体积，中药低剂量组、西药组缺血侧大脑水肿度明显降低，但中药高剂量组脑水肿度未见明显降低，这与神经行为学指标的改善并不完全致。实验中往往以脑梗死体积的变化作为评估干预**药效的优选标准，但亦常会有脑缺血模型动物的行为变化与脑组织病理改变间难以找到相关的联系［9］，可能与坏死周围水肿区神经细胞功能未完全丧失有关。

   本研究证实，加味涤痰汤灌胃对 CIＲ 损伤大鼠神经功能有保护作用，能提高受累肢体肌力、恢复精巧运动、减少脑梗死体积。